2022年度（令和4年度）第21回ABiS電子顕微鏡トレーニング「急速凍結法を用いたCryo-TEM観察」

2023年3月22日（水）・23日（木）

兵庫県立大学　播磨理学キャンパス　研究２期棟
〒678-1205　兵庫県赤穂郡上郡町光都３－１－２

※JR山陽線/山陽新幹線・相生駅南口よりウイング神姫「SPring-8」行きのバスに乗車。
「県立大理学部前」（約22分）バス停にて下車。徒歩3分。
※バス時刻表はこちら

本トレーニングは、氷包埋法による凍結試料作製から、クライオ透過電子顕微鏡（Cryo-TEM）を用いた画像取得までの実践的なトレーニングを行います。

現在、生体試料（細胞、ウイルス、タンパク質）や、液体試料（エマルジョン、インク）などの含水試料を、一切の化学固定・脱水操作を行わず、水を含んだ状態のまま観察できる手法として、幅広い分野でCryo-TEMが注目されています。しかし、非晶質の薄い氷膜内に試料を包埋する（これを氷包埋という）浸漬凍結法や、凍結試料をCryo-TEMで観察するための実験操作、さらに事前に実施すべき予備実験等も含めて、それぞれの研究室ごとに継承されてきた独自のノウハウがあり、これらを身に付けなければ“まともな” クライオ観察はできません。

そこで今回のトレーニングでは、環境制御型急速凍結装置（EM GP）を用いた氷包埋試料の作製と、汎用の透過電子顕微鏡（JEM-2100）に、サイドエントリー型クライオトランスファーホルダー（Cryo Transfer Holder 914）を組み合わせたCryo-TEMの入門編となるトレーニングを行います。

主な装置

環境制御型急速凍結装置　　EM GP（Leicamicrosystems）
　　　　　　　　　　　　　Vitrobot Mark4 (Thermo Fisher Scientific)）
親水化処理装置　　　　　　IB-3（Eiko）
透過電子顕微鏡　　　　　　JEM 2100（JEOL）
クライオ試料ステージ　　　GATAN 914（GATAN）
CMOSカメラシステム　　　TemCam-F216（TVIPS）

3月22日（水）
9:50　受付開始（相生発のバスの時刻、確認ください。）

10:00～13:00

１）急速凍結法（氷包埋）
２）Cryo-TEM法（ネカティブ染色法から、クライオTEM観察まで）
３）クライオTEMでの画像取得法　CMOSカメラ
４）最新技術；培養細胞のためのマイクロパターニング処理の紹介(on-line)

14:00～16:00

　EM GPを用いた浸漬凍結（氷包埋）
　クライオトランスファーホルダーの準備
　試料の保存方法

16:00～17:00 まとめ・質疑応答

3月23日（木）
10:00-13:00 浸漬凍結・Cryo-TEM観察(1)

14:00-16:00 浸漬凍結・Cryo-TEM観察(2)
　Vitrobotを用いた浸漬凍結（氷包埋）

16:00-17:00 質疑応答・まとめ

※トレーニングは２日間のコースとなっていますが、ご都合により午前または午後だけの参加や１日間だけの参加でも問題ありません。その場合、備考欄に参加日時を明記して下さい。

西野有里・宮澤淳夫（兵庫県立大学大学院理学研究科）
伊藤喜子（ライカマイクロシステムズ（株））
荒牧慎二（TVIPS社）
水流功春（プライムテック（株））
末宗周憲（日本エフイー・アイ(株)）

試料の急速凍結技法、ならびにCryo-TEM観察に興味のある方
研究・開発・評価などの仕事でクライオ電子顕微鏡法に従事される方

• クライオTEMの対象試料；タンパク質分子、細胞内小器官分画、ウィルス、培養細胞（モノレイヤーや単細胞など）、エマルジョン、リポソーム、インク（粒径や分散対象が100nm程度のもの）

学術変革領域研究（学術研究支援基盤形成）先端バイオイメージング支援プラットフォーム（ABiS）
日本顕微鏡学会　生体解析分科会
兵庫県立大学　大学院理学研究科
ライカマイクロシステムズ（株）

10名（科研費採択者またはその関係者５名程度を含む）

日本顕微鏡学会 会員：10,000円（不課税）
日本顕微鏡学会 非会員：11,000円（税込み）
※トレーニング会場受付にて、現金でお支払いください（領収書をお渡しいたします）

2023年1月10日（火）

下部にある「■お申し込み」より必要事項をご入力ください。

※本トレーニングへの申込時に役職の明記をお願いします。学生の場合は役職欄に学年の記載をお願いします。

※科研費採択者および関係者は、お申し込みの際に備考欄に下記について記入をお願いします。

• 科研費採択情報（種目、課題名、研究期間、研究代表者）
• ご自身が科研費に採択されていないポスドク・大学院生等は、指導教員の科研費採択情報

※定員になり次第、締め切りとなりますのでご了承ください。

※トレーニングの様子を撮影することがあります。予めご了承ください。